集菌仪和硼酸溶液无菌检查方法验证

硼酸溶液为外用杀菌剂、消毒剂、收敛剂和防腐剂。对多种细菌真菌均有抑制作用。作用原理是它能与细菌蛋白质中的氨基结合而发挥作用。临床上,3%~4%溶液用于皮肤、黏膜(腔)、膀胱、角膜伤口的冲洗清洁,口腔炎和咽喉炎时含漱,急性湿疹和急性皮炎伴大量渗液时湿敷。在《中国药典》明确规定外用灭菌制剂必须进行无菌检查并通过方法验证。本研究对硼酸溶液无菌检查方法进行了验证。

1材料与试药

1.1 仪器:SPX-250B-Z型生化培养箱, 隔水式电热恒温培养箱,医用净化工作台, 智能集菌仪NAI-JJY-Z,封闭式薄膜过滤器(那艾仪器 滤膜孔径:0.45 μm)。

 1.2试药:改良马丁培养基; 硫乙醇酸盐流体培养基;营养肉汤培养基;营养琼脂培养基;玫瑰红钠琼脂培养基;蛋白胨均

2.2预试验 :采用HTY2000集菌仪,用75%酒精在容器表面进行消毒。过滤前先将少量的0.1%蛋白胨溶液湿润滤膜,取10瓶250 ml无菌硼酸溶液按薄膜过滤法滤人滤器中,用0.1%的无菌蛋白胨溶液冲洗,每次100 ml,分别冲洗0次、3次和5次,在最后一次冲洗液中加人含菌数小于100 efu/mL的试验菌液过滤。把100 ml硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基接至滤简内。另取- -装有同体积培养基的容器加入等量试验菌作为对照。按规定温度培养3~5 d。各试验菌同法操作。细菌培养(温度30-~35 C)3 d,霉菌及酵母菌培养(温度23~28 C)5 d。

结果判断:培养结果与对照管比较，未冲洗的试验组中的试验菌均未生长，说明供试品的检验量在该检验条件下有抑菌作用;而冲洗3次和5次的试验组试验菌均生长良好,说明供试品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计,且冲洗次数为3次与5次时,结果无明显差异,故选择冲洗量较少的3次。预试验结果,见表1。

2.3无菌 检查方法验证:实验方法同预实验，冲洗次数为3次,实验结果见表2。结论:硼酸溶液无菌检查采用薄膜过滤法,冲洗次数为3次。

2.4样品验证: 取20瓶250 ml无菌硼酸溶液，采用智能集菌仪NAI-JJY-Z, Py330封闭式薄膜过滤器过滤。过滤前先将少量的0.1%蛋白胨溶液湿润滤膜,样品直接过滤,滤毕,每滤器加无菌0.1%蛋白胨溶液充分振摇,过滤,反复冲洗滤膜,冲洗量每次为100 ml,冲洗3次，冲洗后取其中2个滤器各加硫乙醇酸盐流体培养基100 ml,其中1个加人含菌数<100cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌悬液作为阳性对照管，另管为供试品细菌培养管;取另外2个滤器各加改良马丁培养基100ml,其中一个加入含菌数小于100 cfu/ml的白色念珠菌菌悬液作为阳性对照管，另1管为供试品真菌培养管。分别放人细菌培养箱中30~35 C培养14d,霉菌、酵母菌培养箱中,23~28 C培养14 d,应无菌生长。阳性对照管24- 48 h内应生长良好。

硼酸溶液对细菌、真菌均有抑菌性,本方法通过薄膜过滤，冲洗来消除硼酸溶液的杀菌性。冲洗量太小，无法完全消除其抑菌性,造成实验结果假阴性;冲洗量过大,则可能损伤膜上可能存在的微生物。方法验证中,分别用100 ml冲洗液,冲洗了3次和5次，进行比较,结果发现,2种冲洗量结果无明显差异,故选用冲洗次数较少的3次，进行样品检验。